接下来,随着盐浓度提升到0.3M、0.4M,收集到的馏分体积略有增加,颜色也稍明显了些,但依旧远谈不上富集。
直到切换到含0.5M NaCl的缓冲液时,情况发生了变化。
第十一和第十二支试管里接到的液体,明显变得浑浊了一些,呈现出淡淡的乳黄色,体积也比之前多了几毫升。
沈慕言的心跳微微加速。
她小心地将这两支试管的液体合并到一个更干净的小锥形瓶里,标记好。
这是目前看起来最有可能含有目标蛋白的馏分。
后续更高盐浓度的洗脱,收集到的液体又逐渐变得清亮稀少。
洗脱结束,层析柱旁摆了一排标记着不同编号的试管和两个小锥形瓶。
实验最耗时的部分完成了,但最关键的一步还在后面,检测这些馏分中,是否真的含有具有凝血活性的因子VIII。
活性测定需要用到经过处理的、缺乏因子VIII的血浆和凝血酶原时间测定。
又是一系列精细而容易出错的操作。
老吴主动承担了部分测定工作,他的手法虽然不如沈慕言在某些步骤上那么行云流水,但胜在经验丰富,沉稳老练。
小孙负责准备试剂和记录数据。
沈慕言则统筹全局,同时进行最关键的几个反应步骤的观察和计时。
时间一分一秒过去,检验科里只剩下器皿碰撞的轻响,笔尖划过纸张的沙沙声,以及三人偶尔极低的交流。
“阴性对照,凝固时间超过300秒……”
“阳性对照,凝固时间约45秒……”
“馏分9号……无明显缩短……”
“馏分10号……稍微有点变化?但不明显……”
“馏分11+12合并样……”沈慕言的声音微微顿了一下,所有目光都集中在她手中的秒表和正在水浴中温育的反应管上。
秒针哒哒走着。
30秒……
40秒……
50秒……
试管中的混合液,原本应该保持液态,此刻,却以肉眼可见的速度,开始变得粘稠,出现极其细微的、正在形成的胶冻状凝块!
“凝固了!”小孙忍不住低呼出声,声音带着压抑不住的激动:“真的凝固了!比阳性对照慢一点,但是……但是真的有效!”
老吴立刻凑过来看,脸上严肃的表情终于裂开一道缝隙,眼镜片后的眼睛里闪过难以置信和一丝激动。
接过沈慕言手中的反应管,轻轻倾斜,观察凝块的牢固程度。
“凝血时间……大约85秒。”他报出数据,声音有些干涩:“活性……虽然远比不上标准品,但确实有!真的有凝血活性!”
沈慕言看着那管中已然凝固的胶状物,又看了看旁边记录本上清晰的数据,胸腔里那颗一直悬着的心,终于沉沉地落回了实处。
一股巨大的、混杂着疲惫、欣慰和激动的情绪涌了上来,让她眼眶微微发热。